?url_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Adc&rft.title=Implementaci%C3%B3n+de+m%C3%A9todo+para+detecci%C3%B3n+de+microorganismos+en+vino+blanco&rft.creator=Jim%C3%A9nez+Gonz%C3%A1lez%2C+Alba&rft.contributor=Fern%C3%A1ndez+L%C3%B3pez%2C+Mar%C3%ADa+Ascensi%C3%B3n&rft.subject=Industrial+Engineering&rft.subject=Chemistry&rft.description=Las+t%C3%A9cnicas+moleculares+proporcionan+una+herramienta+excepcional+para+la+detecci%C3%B3n%2C+identificaci%C3%B3n+y+caracterizaci%C3%B3n+de+microorganismos+que+est%C3%A1n+implicados+en+ecosistemas+ambientales+y+de+alimentos.+Sin+embargo%2C+el+estudio+de+la+biodiversidad+microbiana+todav%C3%ADa+est%C3%A1+obstaculizado+por+la+dificultad+de+identificar+y+de+caracterizar+los+microorganismos+sin+aislamiento+previo+en+medios+de+cultivo+ya+que+durante+el+cultivo+o+el+uso+de+medios+de+enriquecimiento%2C+se+puede+alterar+la+estructura+de+la+comunidad+imponiendo+nuevas+condiciones+selectivas.+Es+por+ello+que+no+se+puede+tener+un+conocimiento+completo+de+la+diversidad+microbiana+de+un+ecosistema+dado%2C+ya+que+s%C3%B3lo+se+puede+caracterizar+una+parte%2C+las+cepas+cultivables.+Entre+los+diferentes+organismos+que+se+pueden+identificar+por+estas+t%C3%A9cnicas+moleculares+se+encuentran+las+levaduras.+%0D%0ALas+levaduras+cumplen+un+papel+fundamental+en+la+elaboraci%C3%B3n+del+vino+ya+que+son+responsables+de+la+conversi%C3%B3n+de+az%C3%BAcares+fermentables+en+etanol+y+anh%C3%ADdrido+carb%C3%B3nico.+A+partir+de+este+proceso+se+producen+una+serie+de+metabolitos+en+menor+cantidad+que+aportan+caracter%C3%ADsticas+sensoriales+fundamentales+al+vino.+Tradicionalmente+la+fermentaci%C3%B3n+alcoh%C3%B3lica+del+mosto+se+produc%C3%ADa+de+forma+espont%C3%A1nea%2C+a+partir+de+levaduras+%E2%80%9Csalvajes%E2%80%9D%2C+o+aut%C3%B3ctonas%2C+presentes+en+las+uvas.+De+este+proceso+fermentativo+espont%C3%A1neo+se+obtienen+vinos+poco+reproducibles%2C+con+elevados+riesgos+de+alteraciones+microbiol%C3%B3gicas+y+qu%C3%ADmicas+(ej.+picados+ac%C3%A9ticos%2C+defectos+arom%C3%A1ticos%2C+ralentizaciones+o+paralizaciones+en+el+proceso+de+fermentaci%C3%B3n%2C+etc.)%2C+y%2C+en+general%2C+con+tiempos+de+fermentaci%C3%B3n+m%C3%A1s+largos.+En+su+mayor%C3%ADa%2C+las+levaduras+seleccionadas+actuales+corresponden+a+aislados+del+g%C3%A9nero+Saccharomyces%2C+habitualmente+de+la+especie+Saccharomyces+cerevisiae+ya+que+se+considera+un+microorganismo+domesticado+por+encontrarse+de+forma+abundante+en+los+ambientes+industriales+en+los+que+se+realizan+fermentaciones+alcoh%C3%B3licas%2C+mientras+que+es+relativamente+escasa+en+ambientes+naturales+o+no+alterados+por+actividades+humanas.+Sin+embargo%2C+durante+el+proceso+de+vinificaci%C3%B3n+en+sus+m%C3%BAltiples+etapas+puede+producirse+un+crecimiento+microbiano+no+deseado+que+altere+la+calidad+organol%C3%A9ptica+del+vino.+Dentro+de+estos+microorganismos+se+encuentran+levaduras+no-Saccharomyces+que+pertenecen+a+diferentes+g%C3%A9neros+(Cocolin+et+al.%2C+2003+y+Carrascosa+et+al.%2C+2005).+%0D%0AEn+los+%C3%BAltimos+a%C3%B1os%2C+se+han+realizado+muchos+estudios+describiendo+la+aplicaci%C3%B3n+de+herramientas+de+biolog%C3%ADa+molecular+para+diferenciar+y+caracterizar+levaduras+utilizadas+en+la+fermentaci%C3%B3n+industrial+(Esteve-Zarzoso+et+al.%2C+1999)%2C+siendo+una+de+las+t%C3%A9cnicas+m%C3%A1s+utilizadas+para+ello+la+reacci%C3%B3n+en+cadena+de+la+polimerasa+(Polymerase+Chain+Reaction%2C+PCR).+Este+m%C3%A9todo+es+capaz+de+amplificar+un+segmento+de+ADN+en+un+bill%C3%B3n+de+copias+id%C3%A9nticas+y+de+conseguir+la+detecci%C3%B3n+espec%C3%ADfica+de+secuencias+de+ADN+posibilitando+la+identificaci%C3%B3n+de+microorganismos+contaminantes+(Ibeas+et+al.%2C+1996+y+Suarez+et+al.%2C+2007).+Esta+t%C3%A9cnica+consta+de+tres+pasos+b%C3%A1sicos%3A+Desnaturalizaci%C3%B3n%2C+apareamiento%2C+y+extensi%C3%B3n+que+constituyen+un+ciclo%2C+y+son+repetidos+de+30+a+40+veces+dando+como+resultado+la+copia+de+una+porci%C3%B3n+de+la+mol%C3%A9cula+de+ADN+de+doble+cadena+para+producir+dos+cadenas+ADN+hijas%2C+despu%C3%A9s+de+dos+ciclos+habr%C3%A1+4+copias%2C+etc.%2C+siendo+este+un+aumento+exponencial+en+el+n%C3%BAmero+de+copias.+Una+vez+obtenido+el+amplificado+de+dicho+ADN+se+puede+analizar+mediante+electroforesis+en+gel+de+poliacrilamida+o+agarosa.+%0D%0AAdem%C3%A1s+de+esta+t%C3%A9cnica+se+utiliza+otro+m%C3%A9todo+molecular+para+la+identificaci%C3%B3n+de+microorganismos+basado+en+la+determinaci%C3%B3n+del+polimorfismo+de+longitud+de+los+fragmentos+de+restricci%C3%B3n+(restriction+fragment+length+polymorphism%2C+RFLP)%2C+mediante+su+empleo+se+pueden+diferenciar+los+organismos+por+el+an%C3%A1lisis+de+los+patrones+de+ruptura+que+se+generan+en+un+sitio+espec%C3%ADfico+del+genoma+del+microorganismo%2C+cuando+es+cortado+por+enzimas+de+restricci%C3%B3n+o+endonucleasas+y+luego+son+comparados+en+gel+por+medio+de+electroforesis.+La+aparici%C3%B3n+de+estos+fragmentos+polim%C3%B3rficos+es+debido+a+que+los+organismos+de+diferentes+especies%2C+e+incluso+cepas%2C+difieren+en+la+distancia+de+los+sitios+de+clivaje+para+cada+enzima+de+restricci%C3%B3n.+(Rat%C3%B3n%2C+2004)+%0D%0ALa+extracci%C3%B3n+de+ADN+de+cualquier+organismo%2C+a+un+bajo+coste+y+sin+un+gran+esfuerzo+de+trabajo+en+el+laboratorio+obteniendo+una+concentraci%C3%B3n+y+pureza+suficiente+en+poco+tiempo+son+factores+importantes.+Esto+se+hace+relevante+para+aquellos+investigadores+dedicados+a+la+clasificaci%C3%B3n%2C+identificaci%C3%B3n+y+filogenia+de+las+levaduras%2C+donde+est%C3%A1+demostrado+que+las+t%C3%A9cnicas+que+existen+tanto+bioqu%C3%ADmicas%2C+fisiol%C3%B3gicas%2C+metab%C3%B3licas+y+gen%C3%A9ticas+no+alcanzan+a+ser+suficientes+para+identificar+definitivamente+el+g%C3%A9nero+o+la+especie+(Esteve-Zarzoso+et+al.%2C+1999).+Se+han+descrito+numeroso+m%C3%A9todos+de+extracci%C3%B3n+de+ADN+de+levaduras+diferenci%C3%A1ndose+b%C3%A1sicamente+en+el+tipo+de+procedimiento+utilizado+para+la+lisis+de+la+pared+celular+de+la+levadura%2C+y+el+protocolo+utilizado+para+la+purificaci%C3%B3n+del+ADN.+Casi+todos+los+m%C3%A9todos+que+se+emplean+son+variaciones+tanto+de+procedimientos+de+agitaci%C3%B3n+con+perlas+de+vidrio+(Hoffman+y+Winston%2C+1987%3B+Ros-Chumillas+et+al.%2C2007)+como+de+lisis+de+pared+celular+por+tratamiento+enzim%C3%A1tico+(Querol+et+al.%2C+1992).+La+eficacia+en+estos+m%C3%A9todos+de+extracci%C3%B3n+de+ADN+se+ve+afectada+por+diversos+factores+como+son+una+lisis+incompleta+de+la+c%C3%A9lula%2C+la+presencia+de+inhibidores+enzim%C3%A1ticos%2C+la+posible+degradaci%C3%B3n+del+ADN+o+la+absorci%C3%B3n+del+ADN+a+materiales+externos.+Es+por+ello%2C+que+el+m%C3%A9todo+de+extracci%C3%B3n+de+ADN+que+se+utilice+es+de+vital+importancia+para+lograr+los+resultados+con+la+mejor+calidad+en+an%C3%A1lisis+posteriores.+%0D%0AEn+el+caso+de+la+industria+vin%C3%ADcola%2C+%C3%A9sta+cada+vez+se+hace+m%C3%A1s+globalizada+y+competitiva+y+la+extracci%C3%B3n+de+levaduras+juega+un+papel+fundamental+teniendo+los+productores+de+vino+que+afrontar+el+desaf%C3%ADo+de+mejorar+las+caracter%C3%ADsticas+organol%C3%A9pticas+de+sus+vinos+y+desarrollar+la+tipicidad+para+vinos+arom%C3%A1ticos+complejos.+Actualmente%2C+la+elaboraci%C3%B3n+de+vinos+es+una+actividad+de+gran+inter%C3%A9s+econ%C3%B3mico+en+Chile+abarcando+principalmente+la+parte+central+del+pa%C3%ADs.+Generalmente%2C+las+vinificaciones+se+realizan+mediante+la+inoculaci%C3%B3n+de+levaduras+comerciales+provenientes+de+diferentes+or%C3%ADgenes%2C+de+esta+forma+se+pretende+asegurar+la+correcta+realizaci%C3%B3n+de+la+fermentaci%C3%B3n+as%C3%AD+como+la+obtenci%C3%B3n+de+vinos+de+calidad+m%C3%A1s+uniforme+a+lo+largo+de+las+diferentes+campa%C3%B1as+(Rib%C3%A9reau-Gayon%2C+1985%3B+Giudici+y+Zambonelli%2C+1992%3B+Fleet+y+Heard%2C+1993)+con+el+inconveniente+de+la+p%C3%A9rdida+de+tipicidad+y+originalidad+del+producto.+En+el+caso+de+Chile%2C+su+aislamiento+y+disposici%C3%B3n+geogr%C3%A1fica+hace+posible+que+puedan+existir+cepas+aut%C3%B3ctonas+chilenas+con+propiedades+tecnol%C3%B3gicas+que+pueden+ser+id%C3%B3neas+para+su+utilizaci%C3%B3n+como+in%C3%B3culos+en+futuros+productos%2C+agrupando+as%C3%AD%2C+las+caracter%C3%ADsticas+beneficiosas+de+la+inoculaci%C3%B3n+pero+manteniendo+la+tipicidad+de+la+zona.+Uno+de+los+grandes+desaf%C3%ADos+para+la+industria+vitivin%C3%ADcola+chilena+es+el+desarrollo+de+una+metodolog%C3%ADa+espec%C3%ADfica+para+sus+vinos+pues+Implementaci%C3%B3n+de+m%C3%A9todo+para+detecci%C3%B3n+de+microorganismos+en+vino+blanco+que+al+tratarse+de+una+matriz+compleja+los+m%C3%A9todos+de+extracci%C3%B3n+deben+de+ser+lo+m%C3%A1s+seguros%2C+fiables+y+eficientes+para+obtener+muestras+puras+de+ADN.+%0D%0AEl+objetivo+de+este+proyecto+es+implementar+una+nueva+t%C3%A9cnica+en+la+extracci%C3%B3n+de+ADN+detectando+la+levadura+Saccharomyces+cerevisiae+comercial+EC1118+facilitando+el+procesamiento+de+la+matriz%2C+que+en+este+caso+es+de+vino+blanco.+Para+ello+en+primer+lugar+se+har%C3%A1+crecer+la+levadura+EC1118+en+medio+de+cultivo+YEPD+y+se+aplicar%C3%A1+el+m%C3%A9todo+convencional+de+extracci%C3%B3n+mediante+PowerSoil+DNA+isolation+kit%2C+se+har%C3%A1+PCR+y+RFLP+para+verificar+que+se+ha+extra%C3%ADdo+ese+ADN+y+se+guardar%C3%A1+como+positivo+para+experiencias+posteriores.+En+la+segunda+parte%2C+se+volver%C3%A1+a+preparar+esta+levadura+para+ensayo+y+tras+su+recuento+en+c%C3%A1mara+de+Neubauer+se+escoger%C3%A1+un+volumen+que+permita+obtener+esas+levaduras+en+200+mL+de+vino+blanco+para+una+serie+de+concentraciones+dadas.+Se+proceder%C3%A1+a+extraer+el+ADN+con+el+m%C3%A9todo+tradicional+y+con+el+nuevo%2C+PowerWater+DNA+isolation+kit+y+se+realizar%C3%A1+la+PCR+para+cada+diluci%C3%B3n+con+los+dos+m%C3%A9todos.+%0D%0ALos+resultados+de+este+proyecto+muestran+que+al+aplicar+el+PowerWater+DNA+isolation+kit+se+obtienen+amplificados+para+un+n%C3%BAmero+mayor+de+concentraciones+y+las+bandas+amplificadas+son+m%C3%A1s+n%C3%ADtidas%2C+siendo+por+tanto+m%C3%A1s+eficaz+y+presentando+mayor+calidad+el+ADN+extra%C3%ADdo.+Sin+embargo%2C+el+m%C3%A9todo+de+aplicaci%C3%B3n+es+m%C3%A1s+complicado+y+delicado+necesitando+m%C3%A1s+tiempo+para+llegar+al+resultado+final+siendo+adem%C3%A1s+su+coste+m%C3%A1s+elevado.+Estos+resultados+abren+las+puertas+a+la+instauraci%C3%B3n+de+este+m%C3%A9todo+de+extracci%C3%B3n+de+ADN+y+poder+avanzar+as%C3%AD+en+la+diferenciaci%C3%B3n+y+caracterizaci%C3%B3n+de+diferentes+organismos%2C+en+este+caso+en+particular+las+levaduras+para+su+uso+en+la+industria+vitin%C3%ADcola.&rft.publisher=E.T.S.I.+Industriales+(UPM)&rft.rights=http%3A%2F%2Fcreativecommons.org%2Flicenses%2Fby-nc-nd%2F3.0%2Fes%2F&rft.date=2016-09&rft.type=info%3Aeu-repo%2Fsemantics%2FbachelorThesis&rft.type=Final+Project&rft.type=PeerReviewed&rft.format=application%2Fpdf&rft.language=spa&rft.coverage=east%3D-71.54296899999997%3B+north%3D-35.675147%3B+name%3DChile&rft.rights=info%3Aeu-repo%2Fsemantics%2FopenAccess&rft.identifier=http%3A%2F%2Foa.upm.es%2F43955%2F